聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）的原理
更新時(shí)間：2021-05-07 點(diǎn)擊次數(shù)：4425
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SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）是一種用于根據(jù)蛋白質(zhì)混合物的大小分離其成分的分析方法。
該技術(shù)基于這樣的原理，即帶電分子將在電場(chǎng)中朝具有相反符號(hào)的電極遷移。常規(guī)電泳技術(shù)不能用于確定生物分子的分子量，因?yàn)槲镔|(zhì)在凝膠中的遷移率取決于電荷和大小。
為了克服這個(gè)問(wèn)題，需要對(duì)生物樣品進(jìn)行處理，以使其獲得均勻的電荷，然后電泳遷移率主要取決于尺寸。對(duì)于這種具有不同形狀和大小的蛋白質(zhì)分子，需要進(jìn)行變性（在SDS的幫助下完成），以使蛋白質(zhì)失去二級(jí)，三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)。被SDS覆蓋的蛋白質(zhì)帶負(fù)電，并在上樣時(shí)凝膠并置于電場(chǎng)中，它將朝著陽(yáng)極（帶正電的電極）遷移，并通過(guò)基于分子篩分作用的大小分開(kāi)。通過(guò)染色（蛋白質(zhì)特異性）技術(shù)進(jìn)行可視化后，可以通過(guò)將蛋白質(zhì)的遷移距離與已知分子量階梯（標(biāo)記）的遷移距離進(jìn)行比較來(lái)計(jì)算蛋白質(zhì)的大小。
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