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分子篩（凝膠過濾層析）蛋白純化系統的優缺點
更新時間：2021-04-22 點擊次數：4253
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于分子篩（凝膠過濾層析）蛋白純化系統的優缺點：
分子篩定義：
分子篩層析，又稱為凝膠過濾層析或體積排阻層析。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相，對混合物中各組分按分子大小進行分離的層析技術。具有分子篩作用的物質很多，如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。
避開原因一：工藝放大困難
分子篩層析無法遵循線性放大原則，即使遵循柱床高度不變的原則，工藝流速如何進行調整，也是需要面臨的問題。為保證良好的分離效果，分子篩層析需要求相對較高的裝填高度，然而裝填高度偏高，反壓也勢必會偏高。由于層析填料的耐壓有限，在保證不超壓的前提下，工藝流速會明顯受限，這會使得整個純化過程時間漫長。
避開原因二：層析柱裝填困難
在進行層析柱裝填時，勻漿液濃度需要在一定的范圍內（50%-70%），方可保證沉降均勻、柱效良好，這對層析柱的規格選型有著特殊要求。高度100 cm的層析柱，在勻漿濃度50%-70%時，假設壓縮系數為1.15，則實際使用高度為43.5-60.9 cm，這往往無法達到某些使用者的要求。若選配裝柱器，并考慮柱頭所占空間，這要求實驗空間需高度充足。若考慮將2根層析柱串聯使用，則要求2根層析柱的柱效相當，才可保證分離效果良好，這對裝填技術也有著較高要求。
避開原因三：測定柱效困難
常規柱效測定方法，要求平衡1.5-2 CV，進樣后，洗脫至出峰（參考值：2 CV），流速30 cm/h。若假設裝填高度為60 cm，平衡、洗脫體積總計3.5 CV，經計算，測定一次柱效，需耗時7小時。可以想象，當發現柱效不理想，需要重新裝填并測定柱效時，過程是很繁瑣、耗時的。
避開原因四：維護保養操作困難
當層析柱使用完畢，用20%乙醇保存時，同樣也很耗時。而且當再次使用時，用水將20%乙醇置換走，一般需要3 CV以上，而且由于該過程反壓較大，通常還需要降低流速進行。
總之，采用分子篩層析，各個環節都很繁瑣、耗時，因此，在進行層析工藝設計時，要盡量避開分子篩層析。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關于分子篩（凝膠過濾層析）蛋白純化系統的優缺點。
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